聽聽聽聽聽中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN聽0175-92聽代替ZB聽X09聽011-88聽
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聽聽聽聽中华人民共和国进出口商品检验行业标准聽出口食品中弯曲杆菌检验方法
1　主题内容与适用范围　　
本标准规定了出口食品中弯曲杆菌的检验方法。　　
本标准适用于出口畜肉、禽肉、水产品和牛奶中弯曲杆菌检验。其他出口食品可参照使用。聽
2　设备和材料聽
2.1　微需氧培养设备：最佳微需氧条件为5%氧气、10%二氧化碳和85%氮气。可用具双相压力计的厌氧罐、蜡烛缸、气袋或其他可代用的装置。聽
2.2　天平：称量2000g,感量0.1g。聽
2.3　均质器。聽
2.4　离心机：带50mL离心管。聽
2.5　显微镜：相差或暗视野。聽
2.6　培养箱：25,37和42℃。聽
2.7　水浴箱：37℃。聽2.8　注射器：20mL。聽
2.9　针头过滤器：滤膜孔隙为0.65μm。
2.10聽三角烧瓶：50,250和500mL。
2.11聽平皿：90或100mm。
2.12　吸管：1和5mL。
2.13聽试管：16mm×125mm,带螺旋帽。聽
3　培养基和试剂聽
3.1　弯曲杆菌增菌肉汤：根据用途,加入1号或2号抗生素溶液制成(A1)。聽
3.2　弯曲杆菌分离琼脂(改良Skirrow氏培养基)聽(A2)。聽
3.3　含0.18%琼脂的半固体布氏肉汤(A3)。聽
3.4　布氏琼脂(A4)。聽
3.5　营养肉汤(A5)。聽
3.6　中性红溶液(A6)。聽
3.7　3%过氧化氢溶液。聽
3.8　氧化酶试验试剂(A7)。聽
3.9　亚硝酸盐检测(硝酸盐还原)聽试剂(A8)。聽
3.10聽乙酸铅纸条：将滤纸条浸入饱和乙酸铅溶液中,然后取出,使其干燥。
3.11聽硝酸钾。聽
3.12聽甘氨酸。聽
3.13聽氯化钠。聽
3.14聽盐酸半胱氨酸(cysteine-HCl)。聽
3.15聽马尿酸钠(sodium聽hippurate)。聽
3.16聽萘啶酮酸(nalidixic聽acid):聽每个圆纸片含30μg。
3.17聽头孢菌新素(又称先锋霉素Ⅰ,cephalothin):聽每个圆纸片含30μg。聽
3.18聽茚三酮(ninhydrin)。聽
3.19聽丙酮。
3.20聽丁醇。
4　增菌
4.1　碎牛肉　
　使用加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。称取25g样品,置于均质杯内,加入100mL增菌肉汤,用均质器以8000～10000r/min均质30s。将均质液通过灭菌纱布,倒入一个容量为250mL的三角烧瓶,置微需氧条件下,42℃培养24～48h。聽
4.2　净膛全禽和分割禽肉聽　
　在一个灭菌容器中,用250mL聽灭菌营养肉汤振摇洗涤样品5min。取肉汤,经灭菌纱布过滤,于23000×g、4℃离心20min,或于16300×g、4℃离心30min,弃去上清液,将沉淀物混悬放在250mL三角烧瓶中的100mL加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤中。培养方法同4.1条。聽
4.3　牛奶　
　使用加有按1号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。称取约40g牛奶放入离心管中,按4.2条中的方法离心。弃去脂肪和上清液,将沉淀物混悬放在250mL三角烧瓶内的100mL,增菌肉汤中,培养方法同4.1条。聽
4.4　贝类聽　
　使用加有按2号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤。将100g样品和100mL增菌肉汤放入均质杯中,用均质器以8000～10000r/min转速均质30s。用灭菌纱布将均质液过滤。取50mL滤液放在500mL三角烧瓶内的200mL增菌肉汤中,培养方法同4.1条。聽
4.5　其他食品聽　
　所使用的增菌方法决定于食品的种类。虾、整只海鱼和海鱼片经表面洗涤法(4.2条)处理后,用加有按2号配方配制的抗生素溶液的增菌肉汤增菌。羊肉和猪肉块可先用表面洗涤法处理,再用加有按1号配方配制的抗生素的肉汤增菌。碎肉按4.1条所列方法处理。液体食品按4.3条所列方法处理。各种样品的培养方法均同4.1条。聽聽5　分离和初步鉴定　　取5mL经24～48聽h增菌的培养物,以0.65μm孔径滤膜过滤。取经过滤和未经过滤的增菌培养物,分别在分离用琼脂平板上划线接种,各不少于两个平板。将平皿置微需氧条件下42℃培养24～48h。检查平板上有无透明-白色-棕黄色(可能出现浅红色)凸起、边缘不整齐、有时沿接种线向外扩散的菌落。挑取典型菌落制作湿片,用相差(或暗视野)显微镜检查,本菌呈现快速的螺旋样运动。涂片作革兰氏染色镜检时,本菌为革兰氏阴性,如小逗点状,两菌体的末端相接时,呈S形、海鸥展翅形或螺旋状。挑取初步鉴定为弯典杆菌菌落,在布氏琼脂上划线作纯分离。培养方法同上。根据生化、生长特性和抗生素聽敏感性试验进行菌株证实。聽聽聽聽
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