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实验用试剂的配制



录入时间:2008-10-21 14:16:42 来源:google

l.乳酸苯酚固定液聽聽乳酸10g,聽结晶苯酚10g,聽甘油20g,聽蒸馏水10聽mL。
2.聽1.6%溴甲酚紫聽聽溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中,贮存于棕色瓶中保存备用。用作培养基指示剂时,每1000mL培养基中加入lmL聽1.6%溴甲酚紫即可。
3.聽V.P.试剂聽CuSO4聽1g,蒸馏水l0mL,浓氨水40mL,10%聽NaOH聽950mL。先将CuSO4溶于蒸馏水中,然后加浓氨水,最后加入10%NaOH。
4.聽0.02%甲基红试剂聽聽甲基红0.1g,95%聽乙醇760mL,蒸馏水100mL。
5.聽吲哚反应试剂聽对二甲基氨基苯甲醛8g,聽95%乙醇760mL,浓HCl160mL。
6.聽Alsever’s血细胞保存液聽聽葡萄糖2.05g,聽柠橡酸钠0.8g,聽NaCl聽0.42g,蒸馏水l00mL。以上成分混匀后,微加温使其溶解后,用柠檬酸调节pH聽6.1,分装于三角瓶中(30~50mL/瓶),聽113℃湿热灭菌15min,备用。
7.聽Hank’s液
(l)贮存液A液:(I)NaCl聽80g,聽KCl聽4g,聽MgSO4鈥?H2O聽1g,MgCl2鈥?H2O聽1g,用双蒸馏水定容至450mL:(II)CaCl2聽聽1.4g聽(或CaCl2鈥?H2O聽1.85g)聽用双蒸馏水定容至50mL。将I和II液混合,加氯仿1mL即成A液。
(2)贮存液B液:Na2HPO4鈥?2H2O聽1.52g,KH2PO4聽0.6g,聽酚红0.2g,聽葡萄糖10g,用双蒸馏水定容至500mL,然后加氯仿1mL,酚红应先置研钵内磨细,然后按配方顺序一一溶解。
(3)应用液:取上述贮存液的A和B液各25mL,加双蒸馏水定容至450mL,113℃湿热灭菌20min。置4℃下保存。使用前用无菌的3%聽NaHCO3调至所需pH。
注意:药品必须全部用A.R试剂,并按配方顺序加入,用适量双蒸馏水溶解,待前一种药品完全溶解后再加入后一种药品,最后补足水到总量。
(4)10%小牛血清的Hank’s液:小牛血清必须先经56℃、30min灭活后才可使用,应小瓶分装保存,长期备用。用时按10%用量加至应用液中。
8.聽0.1mol/LCaCl2溶液聽聽双蒸馏水900mL,CaCl2聽11g,定容至lL,可用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌或12l℃湿热灭菌20min。
9.聽0.05mol/L聽CaCl2溶液聽聽双蒸馏水900mL,CaCl2聽5.5g,聽定容至lL,可用孔径为0.22μm的滤器过滤除菌或12l℃湿热灭菌20min。
10.聽α淀粉酶活力测定试剂
(1)碘原液:称取碘11g,聽碘化钾22g,加水溶解定容至500mL。
(2)标准稀碘液:取碘原液15mL,加碘化钾8g,定容至500mL。
(3聽)比色稀碘液:取碘原液2mL,加碘化钾20g,定容至500mL。
(4)2%可溶性淀粉:称取干燥可溶性淀粉2g,先以少许蒸馏水混合均匀,再徐徐倾入煮沸的蒸馏水中,继续煮沸2min,待冷却后定容至100聽mL(此液当天配制使用)。
(5)标准糊精液:称取分析纯糊精0.3g,用少许蒸馏水混匀后倾入400mL水中,冷却后定容至500mL,加入几滴甲苯试剂防腐,冰箱保存。
11.聽pH6.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
称取Na2HPO4鈥?2H2O聽45.23g,柠檬酸(C6H8O7鈥20)聽8.07g,加蒸馏水定容至1000mL。
12.聽0.lmol/L磷酸缓冲液(pH7.0)聽聽称取Na2HPO4鈥?2H2O聽35.82g,溶于1000mL蒸馏水中,为A液:称取NaH2PO4鈥?H2O15.605g,溶于l000mL蒸馏水中,为B液。取A液61mL,聽B液39mL,可得到100mL聽0.lmol/L聽pH7.0的磷酸缓冲液。
13.测定乳酸的试剂
(l)pH9.0缓冲液:在300mL容量瓶中加入甘氨酸11.4g,聽24%NaOH聽2mL,加275mL蒸馏水。
(2)NAD溶液:NAD聽600mg溶于20mL蒸馏水中。
(3)L(+)LDH:加5mg聽L(+)LDH于lmL蒸馏水中。
(4)D(-)LDH:加2mg聽D(-)LDH于lmL蒸馏水中。
14.聽Taq缓冲液(10×)聽聽Tris-HCl聽(pH8.4)聽100mmol/L,KCl聽500mmol/L,MgCl2聽15mmol/L,BSA聽(牛血清清蛋白)聽或明胶lmg/mL
15.聽dNTP混合液聽dATP聽50mmol/L,dCTP聽50mmol/L,dGTP聽50mmol/L,聽dTTP聽50mmol/L。
16.聽1%琼脂糖聽聽琼脂糖lg,聽TAE100mL,聽100℃融化后待凉至40℃倒胶,胶厚度约0.4~0.6。
17.聽TAE聽聽Tris碱4.84mL,冰乙酸1.l4mL,0.5mol/L聽pH8.0的EDTA聽-聽Na2鈥?H2O聽(乙二胺四乙酸钠盐)聽2mL
18.聽0.5mol/L聽EDTA(pH8.0)聽聽在800mL蒸馏水中加186.lg聽EDTA,剧烈搅拌,用NaOH调pH至8.0(约20g颗粒),定容至lL,分装后121℃湿热灭菌备用。
19.硝酸盐还原试剂
(1)格里斯氏(Griess)试剂
A液:对氨基苯磺酸0.5g,稀醋酸(10%左右)150mL
B液:α萘胺0.1g,蒸馏水20mL,聽稀醋酸(10%左右)150聽mL
(2)二苯胺试剂:二苯胺0.5g溶于l00mL浓硫酸中,用20聽mL蒸馏水稀释。
在培养液中滴加A、B液后溶液如变为粉红色、玫瑰红色、橙色或棕色等表示有亚硝酸盐还原,反应为阳性,如无色出现则可加1~2滴二苯胺试剂:如溶液呈蓝色则表示培养液中仍存在有硝酸盐,从而证实该菌无硝酸盐还原作用:如溶液不呈蓝色,则表示形成的亚硝酸盐已进一步还原成其他物质,故硝酸盐还原反应仍为阳性。
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