主题内容与适用范围聽聽
聽聽聽聽聽本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。聽聽
聽聽聽聽聽本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。聽聽
2聽聽引用标准聽聽
聽聽聽聽GB聽4789.2聽聽食品卫生微生物学检验聽聽菌落总数测定聽聽
聽聽聽聽GB聽4789.28聽聽食品卫生微生物学检验聽聽染色法、培养基和试剂聽聽
3聽聽设备和材料聽聽
3．1聽聽温箱：36±1℃。聽聽
3．2聽聽普能冰箱。聽聽
3．3聽聽显微镜。聽聽
3．4聽聽恒温水浴46±1℃。聽聽
3．5聽聽天平。聽聽
3．6聽聽电炉。聽聽
3．7聽聽吸管：1聽mL，10聽mL。聽聽
3．8聽聽载玻片。聽聽
3．9聽聽均质器或乳钵。聽聽
3．10聽聽L聽型涂布棒。聽聽
3．11聽聽灭菌刀，剪，镊子。聽聽
3．12聽聽三角瓶：容量聽500聽mL。聽聽
4聽聽培养基和试剂聽聽
4．1聽聽肉浸液肉汤培养基：GB聽4789.28聽中4.1。聽聽
4．2聽聽酪蛋白琼脂培养基：GB聽4789.28聽中4.65。聽聽
4．3聽聽动力-硝酸盐培养基：GB聽4789.28聽中4.72。聽聽
4．4聽聽缓冲葡萄糖蛋白胨水：GB聽4789.28聽中3.4。聽聽
4．5聽聽血琼脂培养基：GB聽4789.28聽中4.6。聽聽
4．6聽聽3%过氧化氢溶液。聽聽
4．7聽聽甲萘胺-乙酸溶液。聽聽
4．8聽聽对氨基苯碘酸-乙酸溶液。聽聽
4．9聽聽革兰氏染色液：GB聽4789.28聽中2.2。聽聽
4．10聽聽甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基：GB聽4789.28聽中4.64。聽聽
4．11聽聽0.5%碱性复红染色液：GB聽4789.28聽中2.8。聽聽
4．12聽聽木糖-明胶培养基：GB聽4789.28聽中4.66。聽聽
5聽聽操作步骤聽聽
6聽聽操作步骤聽聽
6．1聽聽菌数测定聽聽
聽聽聽聽以无菌操作将检样聽25聽g（mL）（按聽GB聽4789.2聽测定），用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成聽10（-1）聽～10（-5）聽的稀释液。取各稀释液聽0.1聽mL，接种在两个选择性培聽
养基——甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用L聽形棒涂布于整个表面，置聽36±1℃温箱培养基聽12～20聽h聽后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计算后，从中挑取聽5聽个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（或毫升）样品中含蜡样芽胞杆菌数，例如聽MYP聽平板的可疑菌落数为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数（如10），再乘上聽1聽g（或聽mL）检样数（取的是0.1聽mL聽样）则为：聽聽聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽25×4/5×10（4）聽×10=2×10（6）聽
6．2聽聽分离培养聽聽
聽聽聽聽取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基（MYP）上，置37℃培养12～20聽h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落（见6.1）接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。聽聽
6．3聽聽证实试验聽聽
6．3．1聽聽形态观察聽聽
聽聽聽聽本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在聽1μm或1μm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。聽聽
6．3．2聽聽培养特性聽聽
聽聽聽聽本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。聽聽
6．3．3聽聽生化性状及生化分型聽聽
6．3．3．1聽聽生化性状聽聽
聽聽聽聽本菌有动力；能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。聽聽
6．3．3．2聽聽生化分型聽聽
蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别。
表聽1聽聽聽蜡样芽胞杆菌生化分型聽聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽生化试验聽聽
聽聽型别聽聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽柠檬酸盐利用聽聽聽硝酸盐还原聽聽淀粉水解聽聽聽聽聽V-P聽反应聽聽聽聽聽明胶液化聽
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表聽2聽聽聽蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别
项目 巨大芽胞杆菌聽蜡样牙胞杆菌聽苏云金芽胞菌聽蕈状芽胞杆菌聽炭疽芽胞杆
过氧化氢酶 + + 聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽+
动力 聽聽聽聽聽聽聽聽聽± ± 聽聽± 聽聽聽聽聽聽聽- 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽-
硝酸盐还原 - + 聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽+
酪蛋白分解 ± + 聽聽± 聽聽聽聽聽聽聽± 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽±
卵黄反应 聽聽聽聽聽聽聽聽聽- + 聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽+
葡萄糖利用厌氧 - + 聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽+聽聽聽聽聽 聽聽+
甘露醇 聽聽聽聽聽聽聽聽聽+ - 聽聽聽- 聽聽聽聽聽聽聽聽-聽聽 聽聽-
木糖 聽聽聽聽聽聽聽聽± - 聽聽聽- 聽聽聽聽聽聽聽聽聽- 聽聽-
溶血 聽聽聽聽聽聽聽聽聽- + 聽聽聽+ 聽聽聽聽聽聽聽聽± 聽聽±
已知致病菌特性 聽产生肠毒素聽对昆虫致病的内毒素结晶聽假根样生长聽对动物和人致病 聽聽聽
注：+90%～100%的菌株阳性；-90%～100%的菌株阴性；±大多数菌株阳性；-（+）大多数菌株阴性。聽聽
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加聽0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持聽1.5聽min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体（如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存聽1～2聽d后再检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。

聽

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