2.2.2.3聽聽PCR一变性梯度凝胶电泳聽(PCR．denaturing聽聽g聽radient聽gelelectmphoresis。PCR．DGGE)PCR．DGG最初被用来监测基因突变。聽后来被广泛的应用于微生物研究，目前国外已将该技术已广泛用于食品中乳酸杆菌菌株的筛选、分组、鉴定以及对食品品质评估聽和质量控制。TABASCO等2007年用PCR．DGGE技术成功的将发酵奶制品中的保加利亚乳酸杆菌、嗜酸乳酸杆菌、类干酪乳酸杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌等进行了鉴别，聽FONTAN等也用同样的技术将真空包装牛肉中的清酒乳酸杆菌、弯曲乳酸杆菌、聽冷明串珠菌区分出来。由于PCR．DGGE可以区分含碱基成分不同而片段大小一致的DN聽A序列，甚至一个碱基对的不同都会引起DN聽A片段停留于凝胶的位置各异，所以与传统乳酸杆菌的鉴定技术相聽比，具有快速、全面的特点。同时DGGE技术也有其限制性，主要表现在：①聽只能分离较小的片段(最长达1聽0聽0聽0聽b聽p)聽，因此提供的信息有限，片段太长时解离率下降。②DGG在种水平上鉴定细菌菌群结构有限。③依据16S聽r聽DNA的DGGE研究菌群多样性，由于某些种类16聽Sr聽DNA的拷贝之间的异质性问题及异源核酸双链分子的检出可能会导致自然菌群聽中细菌数量的过多估计。聽聽
2.2.2.4聽多重PCR(聽multiplex聽PCR)聽由于乳酸杆菌种类繁多，菌群组成复杂，聽因此传统的PCR方法难以达到多种乳酸杆菌快速同时鉴定的目的，聽这一不足可以通过在单一反应中同时扩增多个位点的多重PCR预以弥补。由于多重PCR同时扩增多个目的基因，具有节省时间、聽降低成本、提高效率的优点，所以一经提出即得到研究者的青睐，并且发展迅速，现已成为乳聽酸杆菌分类鉴定的一项成熟而重要的研究手段。已有学者利用这项技术同时将嗜酸乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、德氏乳酸杆菌、聽瑞士乳酸杆菌、聽鼠李糖乳酸杆菌、聽植物乳酸杆菌区聽
分开来。其它一些乳酸杆菌如短乳酸杆菌、发酵乳酸杆菌、聽希氏乳酸杆菌、聽食果糖乳酸杆聽菌等都可以应用多重PCR方法进行一次性鉴别。该技术的难点在于引物的设计和PCR扩增条件的标准化等，此外，对操作者技术要求较高并且多重PCR的结果特异性较差。
2.2.2.4聽多重PCR(multiplex聽聽PCR)由于乳酸杆菌种类繁多，菌群组成复杂，聽因此传统的P聽CR方法难以达到多种乳酸杆菌快速同时鉴定的目的，这一不足可以通过在单一反应中同时扩增聽多个位点的多重PCR预以弥补。由于多重PCR同时扩增多个目的基因，具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，所以一经提出即得到研究者的青睐，并且发展迅速，现已成为乳聽酸杆菌分类鉴定的一项成熟而重要的研究手段。已有学者利用这项技术同时将嗜酸乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、德氏乳酸杆菌、聽瑞士乳酸杆菌、聽鼠李糖乳酸杆菌、聽植物乳酸杆菌区聽
分开来。其它一些乳酸杆菌如短乳酸杆菌、发酵乳酸杆菌、希氏乳酸杆菌、食果糖乳酸杆菌等都可以应用多重PCR方法进行一次性鉴别。该技术的难点在于引物的设计和PCR扩增条件的标准化等，此外，对操作者技术要求较高并且多重PCR的结果特异性较差。聽聽
3聽展望聽
聽聽由于乳酸杆菌对人体的作用存在株的差异，同一种内不同株间其功能和特性各异，因此对聽于乳酸杆菌种株水平鉴定技术的研究已成为国内外研究的焦点，也是确保含有乳酸杆菌食品安全性的重要保障。目前，各种核酸技术在乳酸杆菌鉴定中的应用都还处于探索性阶段且各有优缺点，PCR方法只能够对一部分乳酸杆菌进行鉴别，PFGE分型方法中仍然存在着不能被鉴定的同源性菌株，未来的研究中发展和完善现有的核酸分型技术，创建更新更完备的分聽型鉴定方法将是各国学者潜心研究的重点。目前，基因芯片技术发展迅速，并越来越多的应用于微生物的分型和鉴定，在各种核酸分型鉴定技术成熟稳定后，建立乳酸杆菌的基因芯片技术将指日可待。聽聽聽
聽聽聽

聽

上一篇：乳酸杆菌分离鉴定技术研究进展——2

下一篇：食品病原微生物快速检测技术研究进展——1