聽聽聽大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。聽
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。聽
1聽设备和材料聽
1.1聽温箱：36±1℃。聽
1.2聽冰箱:0～4℃。聽
1.3聽恒温水浴聽:44.5±0.5℃。聽
1.4聽天平。聽
1.5聽显微镜。聽
1.6聽均质器或乳钵。聽
1.7聽平皿:直径为90mm。聽
1.8聽试管。聽
1.9聽吸管。聽
1.10聽广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。聽
1.11聽玻璃珠:直径约5mm。聽
1.12聽载玻片。聽
1.13聽酒精灯。聽
1.14聽试管架。聽
2聽培养基和试剂聽
2.1聽乳糖胆盐发酵管:按GB聽4789.28中4.9规定。聽
2.2聽伊红美蓝琼脂平板:按GB聽4789.28中4.25规定。聽
2.3聽乳糖发酵管:按GB聽4789.28中4.10规定。聽
2.4聽EC聽肉汤:按GB聽4789.28中4.11规定。聽
2.5聽磷酸盐缓冲稀释液:按GB聽4789.28中3.22规定。聽
2.6聽生理盐水。聽
2.7聽革兰氏染色液:按GB聽4789.28中2.2规定。聽
3聽操作步骤聽
3.1聽检样稀释聽
3.1.1聽以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8聽000-10聽000聽r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。聽
3.1.2聽用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。聽
3.1.3聽另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。聽
3.1.4聽根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。聽
3.2聽乳糖发酵试验聽
将待检样品接种于乳糖聽胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃聽温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。聽
3.3聽分离培养聽
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃聽温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。聽
3.4聽证实试验聽
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置聽36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。聽
3.5聽报告聽
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。聽
4聽粪大肠菌群(faecal聽coliform)聽
4.1聽用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置聽培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。聽
4.2聽结果报告聽
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。

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