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    常用培养基配方(一)



    录入时间:2010-7-2 15:15:20 来源:青岛海博论坛论坛

    ONPG培养基
    成分:
      邻硝基酚β-D-半乳糖昔(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG)聽60mg
      0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10ml
      1%蛋白胨水(PH7.5) 30ml
    制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5ml,用橡皮塞塞紧。
    试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±1℃培养1~3h和24h观察结果。如果β-半乳糖苷酶产生,则于1~3h变黄色,如无此酶则24h不变色。
    西蒙氏柠檬酸盐培养基
    成分:
      氯化钠 5g
      硫酸镁(MgSO4鈥?H2O) 0.2g
      磷酸二氢铵 1g
      磷酸氢二钾 1g
      柠檬酸钠 5g
      琼脂 20g
      蒸馏水 1000ml
      0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
      pH6.8
    制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化。然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。
    试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。
    糖发酵管
    成分:
      牛肉膏 5g
      蛋白胨 10g
      氯化钠 3g
      磷酸氢二钠(Na2HPO4鈥?2H2O) 2g
      0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12ml
      蒸馏水 1000ml
      pH7.4
    制法:
      1、葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。
      2、其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5ml糖溶液加入于100ml培养基内,以无菌操作分装小试管。
    注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
    试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。
    缓冲葡萄糖蛋白胨水(MRVP试验用)
    成分:
      磷酸氢二钾 5g
      多胨 7g
      葡萄糖 5g
      蒸馏水 1000ml
      pH7.0
      制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1ml,121℃高压灭菌15min。
    甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性。甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30ml95%乙醇中,然后加入20ml蒸馏水。
    V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养,加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml,充分振摇试管,观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
    克氏柠檬酸盐培养基
    成分:
      柠檬酸钠 3g
      葡萄糖 0.2g
      酵母浸膏 0.5g
      单盐酸半胱氨酸 0.1g
      磷酸二氢钾 1g
      氯化钠 5g
      0.2%酚红溶液 6ml
      琼脂 15g
      蒸馏水 1000ml
    制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。
    试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果。阳性者培养基变为红色。

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