（十四）绿菌属的富集培养及分离

绿菌属含有叶绿素，是光合性的严格厌氧的有机体。特征是单细胞卵球形，不运动，革兰氏阴性。由于具有叶绿素，细胞团块呈绿色；吸收峰为750 纳米。能氧化硫化氢于细胞外沉淀，此类细菌分布于海泥、淡水泥及海水中．泥生绿菌能将硫氧化为硫酸盐、嗜硫代硫酸盐绿菌能氧化硫代硫酸盐，连四硫酸盐及分子氮．

1 ．富集培养

( 1 ）富集培养液成分及其制备：

NH₄Cl聽聽聽 1 克

KH₂PO₄聽聽聽 1 克

MgCl₂ 聽聽聽0.5克

NaHCO₃聽聽聽 2 克

Na₂S ·9H₂O聽聽 1 克

NaCl聽 聽海生种30 克

淡水种10 克

FeCl₃·6H₂O聽聽聽 0.0005克

水1000 毫升

将上述各盐溶解于水中，用磷酸调pH 为7.3 。因此种培养液有很高的选择性．无需灭菌，但非常不稳定．需在使用前配制。

（2）接种培养：

① 在大量曝光和分解有机物产生硫化氢的地方采淤泥．

② 将淤泥放在50毫升的广口磨口玻璃塞瓶中，放入数量0.5-1 厘米高．

③ 装满液体富集培养基，上塞排除空气．

④ 置于20-30 ℃ 下培养，并在离瓶4 时处放几盏25 瓦钨丝灯。

⑤培养3-10天后观察，至较多绿色细菌出现为止，随后红色或紫色菌也跟着发生，故不宜拖延分离时间。若有红色或紫色菌很快出现．并且生长旺盛，应试验不同来源的材料。

2 ．分离纯化培养

（1）培养基成分及制备，绿菌属琼脂培养基成分如下：

NH₄Cl聽聽聽 1 克

KH₂PO₄聽聽聽 1 克

MgCl₂ 聽聽聽0.5克

NaCl聽 聽海生种30 克

淡水种10克

琼脂聽聽聽聽 10-15克

水聽聽聽 700毫升

将上述各成分混合于高压下蒸煮溶解。如不立即使用，应在121 ℃ 蒸气下灭菌15 分钟。

立即使用前，先制备下列溶液．

① NaHCO₃聽 聽2 克加水100 毫升。

② Na₂S·9H₂O 1克加水100毫升。

③ FeCl₃·6H₂O聽 5 毫克加水100 毫升。

④ 1N 的H₃PO₄

将以上各液于121 ℃ 蒸汽下灭菌15分钟。同时将绿菌属琼脂培养基融化，于水溶中冷至45 ℃ 。温热溶液① 、② ．③ 至45 ℃ ，无菌地倒入上述培养基充分混合。用无菌的磷酸调pH7.3 。分装于150×16 毫米钠玻璃试管中，放在45 ℃ 水溶中．

采用摇管法〔 见下节的着色菌属的分离〕 培养。

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