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    培养基整体性能的评估



    录入时间:2015-5-4 10:52:19 来源:青岛海博论坛论坛生物

    理化指标

    理化指标通常由生产厂商通过对原材料、生产工艺、生产过程进行质控,使用者通常用感官检查或pH测定进行确认。

    理化指标包括培养基的色泽,培养基的水分含量,培养基的澄清度,培养基的PH,固体培养基的凝胶程度。

    微生物学指标

    培养基对目标菌的促生长能力(生长率),培养基对非目标菌的抑制能力(选择性),培养基的指示能力(生化特性)

    微生物学评估方法-
    使用一套合适的质控菌株进行测试

    定量法—培养基生产厂家或对培养基质量有特殊要求的实验室对培养基质控聽;

    半定量法—实验室对培养基的质控;

    定性法—实验室对培养基的质控。

    固体培养基的生长率测试-定量法

    选择合适稀释度的质控菌悬液(目标菌)0.1mL,均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。并按标准规定的培养条件培养平板。

    计算生长率PR聽:聽

    PR聽=聽NS/N0

    PR:生长率。

    NS:待测培养基平板上得到的菌落总数。

    N0:参比培养基平板上获得的菌落总数(该菌落总数应≥100CFU)聽

    质控菌株的要求

    具典型反应特性的生长良好的阳性菌株聽;

    弱阳性菌株(对培养基中选择剂等试剂敏感性强的菌株);聽

    不具有该特性的阴性菌株;聽

    部分或完全受抑制的菌株;

    固体培养基的生长率测试半定量法

    将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

    1ul接种环按图划线接种:

    计算生长指数G:

    每条有比较稠密菌落生长的划线则G1,每个培养皿上G最大为16

    如果仅一半的线有菌落生长,则G0.5

    如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线的一半,则G0

    记录每个平板的得分总和便得到G

    固体培养基的生长率测试-定性法

    将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

    1ul接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线(细菌),或用接种针直接挑取斜面培养物点种接种(霉菌)。并按标准规定的培养条件培养平板。

    培养后按以下方法对培养基计分:

    0聽表示无生长;

    1聽表示微弱生长;

    2聽表示生长良好。

    固体培养基生长率评价标准

    非选择性固体培养基和固体计数培养基PR值应不小于0.7G值应大于6

    选择性固体培养基PR值一般应不小于0.5,最低应为0.1聽

    选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7聽

    定性法目标菌得分应为2

    固体培养基选择性测试-半定量法

    将质控菌株接种到非选择性肉汤培养过夜。

    1μl接种环取选择性测试工作菌悬液1环,在待测培养基表面划六条平行直线(如图),同时接种两个平板,划线时可在培养基下面放一个模板图,按标准规定的培养条件培养平板。

    固体培养基选择性测试-半定量法

    计算G:

    每条有比较稠密菌落生长的划线则G1,每个培养皿上最多为6分。

    如果仅一半的线有菌落生长,则G0.5

    如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线的一半,则G0。聽

    评价标准:

    G应小于6

    固体培养基生化特性测试-定性法

    分别观察质控菌株(包括目标菌和非目标菌)在培养基上形态、颜色及生化特征。

    评价培养基的指示系统是否正常。

    液体培养基测试-半定量法

    混合菌接种:在待测液体培养基中接种10~100CFU目标菌,同时接种1000~5000CFU非目标菌,按标准规定条件培养。

    非目标菌接种:在待测液体培养基中分别接种上述非目标菌,按标准规定条件培养。

    10μL接种环取1环混合菌接种培养物,划线接种于特定的选择性平板上,按标准规定条件培养。

    吸取非目标菌接种培养物10μL,以涂布法或倾注法接种于非选择性平板上(TSA),按标准规定条件培养。

    评价标准

    目标菌在选择性平板上的菌落应>10CFU,则生长率良好。

    非目标菌在非选择性平板上菌落数应<100CFU,则表示待测培养基选择性良好。

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